Plasmide CRISPR d'Activation (h) TMEM125: sc-414318-ACT

Le gène humain **TMEM125** code une protéine transmembranaire prédite à passages multiples, dont l’annotation fonctionnelle reste limitée, ce qui concorde avec des rôles dans l’organisation membranaire et la régulation de la signalisation intracellulaire. En tant que facteur membranaire putatif, TMEM125 est étudié dans le contexte de l’homéostasie des organites, du trafic protéique et des voies sensibles au stress qui influencent la survie et l’adaptation cellulaires. Des jeux de données transcriptomiques et d’associations génétiques ont relié des variations d’expression de TMEM125 à des états cellulaires pertinents pour les maladies, notamment des programmes métaboliques et inflammatoires altérés, ce qui en fait une cible d’intérêt pour des analyses mécanistiques. La modulation expérimentale de TMEM125 soutient les efforts de cartographie des voies, où des protéines membranaires peuvent façonner la signalisation proximale aux récepteurs, la dynamique vésiculaire et les réponses transcriptionnelles en aval.

TMEM125 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de TMEM125 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

TMEM125 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus TMEM125 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription TMEM125, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de TMEM125. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus TMEM125 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de TMEM125 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie TMEM125 dans les cellules tumorales présentant une expression de TMEM125 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.