TM4SF19 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-406884

Panoramica

TM4SF19 (transmembrane 4 L six family member 19) codifica una proteina di membrana di tipo tetraspan, che si prevede organizzi microdomini di membrana e moduli le interazioni cellula–cellula o cellula–matrice. In quanto membro della famiglia TM4SF, TM4SF19 è associata a processi quali il raggruppamento dei recettori, la trasduzione del segnale a livello della membrana plasmatica e la regolazione di vie legate all’adesione che influenzano la migrazione e l’organizzazione epiteliale. Alterazioni dell’espressione delle proteine TM4SF sono state riportate in molteplici contesti oncologici, a supporto dell’interesse per TM4SF19 nella biologia dei tumori, nei fenotipi invasivi e nella segnalazione del microambiente. Gli studi di perturbazione di TM4SF19 possono inoltre chiarire i meccanismi del traffico delle proteine di membrana e la composizione del “surfaceome” nelle cellule umane.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO TM4SF19 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene TM4SF19 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del TM4SF19 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto TM4SF19 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina TM4SF19.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di TM4SF19 per lo studio della segnalazione di TM4SF19, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni TM4SF19 critici per la funzione di TM4SF19
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di TM4SF19 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal TM4SF19 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal TM4SF19 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus TM4SF19. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal TM4SF19 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR TM4SF19 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia TM4SF19 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio TM4SF19 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.