TINAGL1 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-416499-ACT

TINAGL1（tubulointerstitial nephritis antigen-like 1）は、細胞外マトリックス（ECM）に関連する分泌型糖タンパク質をコードしており、細胞—マトリックス接着や細胞周囲環境（ペリセルラー環境）のリモデリングに関与するとされています。TINAGL1は、遊走・接着・生存といった細胞挙動の制御とも関連し、これらはインテグリン媒介シグナル伝達やECMの組織化と交差する過程です。ヒト組織およびモデル系では、TINAGL1の発現変動が上皮—間葉系の可塑性や浸潤性表現型の変化と関連づけられており、腫瘍進展や転移能の研究における重要性を支持しています。マトリセルラー因子として、TINAGL1は、細胞外からの手がかりがどのようにシグナルネットワークや微小環境依存的な細胞状態を形成するのかを解析するための有用な切り口となります。

TINAGL1 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性TINAGL1の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

TINAGL1 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における TINAGL1 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はTINAGL1転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性TINAGL1の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のTINAGL1遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるTINAGL1依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびTINAGL1発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるTINAGL1経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。