Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
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TIM Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-423480
- Specie Target: mouse
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- TIM Il plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) è un pool di plasmidi, ciascuno dei quali codifica la nucleasi Cas9 e un RNA guida (gRNA) specifico per il bersaglio di 20 nt, progettato per la massima efficienza di knockout utilizzando sequenze derivate dalla libreria GeCKO v2
- Le sequenze gRNA indirizzano Cas9 a indurre rotture a doppio filamento (DSB) sito-specifiche nel locus genomico TIM, con conseguente knockout genico tramite giunzione non omologa (NHEJ)
- I geni di resistenza alla puromicina e RFP sono fiancheggiati da siti LoxP, consentendo la rimozione dei marcatori di selezione tramite la ricombinasi Cre (Cre Vector: sc-418923) dopo aver stabilito linee cellulari knockout stabili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: TIM Antibody (H-11): sc-166785
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
TIM Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m) | sc-423480 | 20 µg | $397.00 |
Panoramica
Il gene murino **Tpi1** codifica la trioso-fosfato isomerasi (TIM), un enzima chiave della glicolisi che catalizza l’interconversione reversibile tra diidrossiacetone fosfato e gliceraldeide-3-fosfato. Mantenendo un flusso efficiente attraverso la glicolisi, TIM sostiene la produzione cellulare di ATP, l’equilibrio redox e l’accoppiamento metabolico con vie quali la via dei pentoso fosfati e gli apporti anaplerotici al ciclo dell’acido tricarbossilico (TCA). L’attività di Tpi1 è quindi fondamentale per l’omeostasi bioenergetica nei tessuti proliferativi e differenziati, e la sua disregolazione è rilevante negli studi sulle risposte allo stress metabolico, sull’adattamento all’ipossia e sui fenotipi dipendenti dalla glicolisi. Un’alterata regolazione della glicolisi che coinvolge Tpi1 viene inoltre comunemente analizzata in modelli di disfunzione neurologica, patologie emolitiche e riprogrammazione metabolica associata al cancro.
Il plasmide CRISPR/Cas9 KO TIM (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Tpi1 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Tpi1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.
Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Tpi1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina TIM.
Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Tpi1 per lo studio della segnalazione di TIM, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.
Caratteristiche principali
- sgRNA mirati agli esoni Tpi1 critici per la funzione di TIM
Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Tpi1 per migliorare l'efficienza del knockout
Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione
Varianti di progettazione
CRISPR +/- HDR
- Gli gRNA codificati dal TIM CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal TIM CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Tpi1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
I costrutti donatori HDR codificati dal TIM Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR TIM (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Tpi1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Tpi1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.