TIGAR CRISPR/Cas9 케이오 플라스미드 (m): sc-435668
- Target species: mouse
- 20 µg of transfection-ready, purified plasmid DNA; Suitable for up to 20 transfections
- TIGAR CRISPR/Cas9 녹아웃(KO) 플라스미드 (m)은 플라스미드 풀로, 각 플라스미드는 Cas9 뉴클레아제와 표적 특이적 20nt 가이드 RNA(gRNA)를 암호화하며, GeCKO v2 라이브러리에서 유래한 서열을 사용하여 녹아웃 효율을 극대화하도록 설계되었습니다.
- gRNA 서열은 Cas9가 TIGAR 게놈 위치에서 부위 특이적 이중 가닥 절단(DSBs)을 유도하도록 유도하며, 이는 비동종 말단 결합(NHEJ)을 통해 유전자 녹아웃을 초래합니다
- TIGAR HDR 플라스미드 (m) (sc-435668-HDR)는 TIGAR CRISPR/Cas9 KO 플라스미드 (m)와 함께 공동 형질 도입하는 것이 권장되며, 이를 통해 푸로마이신 내성 카세트 및 RFP 리포터 유전자의 HDR 매개 통합을 통해 성공적으로 편집된 세포를 선별할 수 있습니다
- TIGAR HDR 플라스미드 (m)는 TIGAR CRISPR/Cas9 KO 플라스미드 (m) 내 gRNA 표적 부위에 대응하는 상동성 유도 복구(HDR) 템플릿을 각각 포함하는 플라스미드 풀입니다
- 각 HDR 플라스미드는 푸로마이신 저항성 및 RFP 카세트를 둘러싸고 있는 두 개의 약 800bp 길이의 상동성 암을 포함하며, 이는 Cas9에 의해 유도된 이중 가닥 절단 부위 주변의 게놈 DNA 서열에 결합하여 정밀한 HDR 매개 통합을 촉진하도록 설계되었습니다
- 푸로마이신 내성 및 RFP 유전자는 LoxP 사이트로 둘러싸여 있어, 안정적인 녹아웃 세포주를 확립한 후 Cre 재조합효소(Cre 벡터: sc-418923)를 통해 선택 마커를 제거할 수 있습니다
- Transfection, gene knockout효율은 WB, IF나 IHC등 방법으로 측정할수있습니다, 권장하는 항체는 TIGAR Antibody (E-2): sc-166290
주문정보
| 제품명 | 카탈로그 번호 | 단위 | 가격 | 수량 | 관심품목 | |
TIGAR CRISPR/Cas9 케이오 플라스미드 (m) | sc-435668 | 20 µg | $397.00 | |||
TIGAR HDR 플라스미드 (m) | sc-435668-HDR | 20 µg | $445.00 |
개요
마우스 Tigar는 TIGAR(TP53 유도 해당작용 및 세포사멸 조절자)를 암호화하며, 해당과정의 흐름을 조절하고 오탄당인산경로 활성 및 NADPH 생성 촉진을 통해 항산화 방어를 지원하는 과당-2,6-이인산가수분해효소 유사 단백질이다. TIGAR는 세포의 산화환원 균형과 대사 재프로그래밍에 영향을 미침으로써 p53 신호전달 하위에서 세포사멸 민감도, 자가포식, 스트레스 반응을 조절한다. TIGAR 기능의 변화는 산화 스트레스, 대사 적응, 염증과 관련된 다양한 맥락에서 보고되어 왔으며, 실험계에서 종양 생물학, 신경퇴행, 허혈 관련 손상 기전 연구에 중요한 표적이 된다.
TIGAR CRISPR/Cas9 KO 플라스미드 (m)는 mouse 세포주에서 Tigar 유전자를 표적 파괴하도록 설계된 플라스미드 풀입니다. 이 풀에 포함된 각 플라스미드는 Streptococcus pyogenes Cas9 뉴클레아제와 함께 Tigar 유전자좌 내의 별개의 부위를 표적으로 하는 고유한 sgRNA를 공동 발현하며, 성공적으로 형질 도입된 세포를 형광으로 식별하고 농축할 수 있도록 GFP를 암호화합니다. 이 멀티 가이드 전략은 기능적 녹아웃을 유발하는 프레임 시프트 또는 결손을 유도할 가능성을 높여, 단일 가이드 접근법에 비해 더 강력한 대안을 제공합니다. 여러 부위에서 유도된 이중 가닥 절단(DSB)은 비동종 말단 결합(NHEJ)을 통해 해결되거나, 포함된 HDR 기증자 템플릿과 함께 사용될 경우 유전자좌 내의 정의된 표적 부위에서 동종 재조합에 의한 복구(HDR)를 통해 해결됩니다.
RFP 발현 HDR 도너와 함께 사용할 경우, GFP 및 RFP 형광을 함께 활용하여 형질전환된 세포 집단과 편집된 세포 집단을 구별할 수 있어, 유세포 분석 기반 선별 및 클론 선택 워크플로우를 간소화할 수 있습니다.
상동성 유도 복구(HDR) 도너 — RFP 리포터가 포함된 푸로마이신 카세트
확인되고 선택 가능한 녹아웃 클론을 필요로 하는 응용을 위해, TIGAR HDR 플라스미드(m)는 정의된 Tigar 표적 부위에 특이적인 상동성 암(homology arms)으로 둘러싸인 푸로마이신 저항성 카세트(PuroR) 및 적색 형광 단백질(RFP) 리포터를 포함하는 HDR 도너 구조체를 포함합니다.
TIGAR CRISPR/Cas9 KO 플라스미드 (m)와 공동 형질 도입 시:
- PuroR-RFP 카세트는 HDR을 통해 Cas9 절단 부위에 통합되어 Tigar의 개방형 독판(open reading frame)을 파괴합니다.
RFP 형광은 성공적인 통합을 즉시 시각적으로 나타내므로, 푸로마이신 선별 전이나 선별과 병행하여 형광 기반의 편집된 세포 식별 또는 선별이 가능합니다.
성공적으로 편집된 세포는 푸로마이신 내성을 통해 확인되므로, 클론 스크리닝 부담을 크게 줄여줍니다.
이 선별 전략은 하류 기능 연구, 약물 스크리닝 또는 모델 개발을 위한 안정적인 클론 KO 세포주를 생성하는 데 이상적입니다.
Cre-lox 카세트 제거 시스템
이 HDR 기증자 구조체는 PuroR-RFP 선택 카세트를 둘러싼 loxP 사이트를 갖추고 있어, 클론 확인 후 마커를 깨끗하게 제거할 수 있습니다. 포함된 Cre 벡터: sc-418923을 통한 Cre 재조합효소의 일시적 발현은 카세트를 절제하여 Tigar 유전자좌 내에 최소한의 잔류 loxP 부위만 남기고, 하류 분석에 대한 잠재적인 혼동 요인을 제거합니다.
이 2단계 접근 방식:
- 국소 염색질 구조 및 인접한 조절 인자에 대한 교란을 최소화합니다
편집된 유전자좌에서 거의 자연 상태와 유사한 게놈 환경을 복원합니다
동일한 세포주에서 추가 편집을 위해 푸로마이신 선별 전략을 재사용할 수 있게 합니다
주요 특징
- TIGAR 기능에 필수적인 Tigar 엑손을 표적화하는 gRNA
전달 과정을 간소화하기 위해 단일 플라스미드에서 SpCas9 및 sgRNA를 공동 발현
양성 클론 선별을 위한 푸로마이신 내성 HDR 기증자
마커를 원활하게 제거하기 위한 Cre 재조합 효소 벡터가 포함된 loxP로 둘러싸인 PuroR 카세트
형질전이를 통한 전달을 위해 바로 사용 가능한 상태로 제공됨
연구용으로만 사용하세요. 진단 또는 치료용이 아닙니다.