Plásmido CRISPR de Activación (h) TIF1γ: sc-403230-ACT

TRIM33 (TIF1γ) codifica un correagulador transcripcional con motivo tripartito que integra la actividad de ligasa de ubiquitina asociada a la cromatina con la regulación génica dependiente de señales. TIF1γ modula la señalización TGF-β/BMP mediada por SMAD, influye en la elongación transcripcional y la remodelación de la cromatina, y participa en las respuestas al daño del ADN mediante la regulación de complejos proteicos nucleares. Al ajustar programas transcripcionales específicos de linaje y decisiones sobre el destino celular, TRIM33 se estudia en contextos como la diferenciación hematopoyética, la transición epitelio-mesenquimal y las redes de señalización de estrés. La desregulación de la función de TRIM33 y las alteraciones en la salida de la vía de TGF-β se han asociado con la biología tumoral y otros trastornos que implican un control transcripcional aberrante.

TIF1γ El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de TRIM33 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

TIF1γ El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus TRIM33 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional TRIM33, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de TIF1γ. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo TRIM33 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de TIF1γ en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía TIF1γ en células tumorales con expresión de TRIM33 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.