Thyroperoxidase Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-423484

Panoramica

Il gene murino **Tpo** codifica la tireoperossidasi (TPO), un enzima apicale di membrana, eme-dipendente, presente nelle cellule follicolari tiroidee, che catalizza l’ossidazione dello ioduro e l’iodazione e l’accoppiamento della tireoglobulina per generare gli ormoni tiroidei T3 e T4. L’attività della TPO integra il trasporto e l’organificazione dello ioduro con il controllo redox tramite sistemi produttori di H2O2 come DUOX/DUOXA, sostenendo la biosintesi ormonale e l’omeostasi del follicolo tiroideo. L’alterazione dell’ormonogenesi tiroidea dipendente da Tpo è associata, nei sistemi modello, a una regolazione metabolica modificata e a fenotipi di crescita e neurosviluppo, e offre punti d’ingresso meccanicistici nella patologia tiroidea autoimmune, in cui la TPO è un importante antigene. Di conseguenza, **Tpo** rappresenta un nodo funzionale per studiare i programmi di differenziamento tiroideo, la segnalazione di feedback endocrino e le risposte allo stress ossidativo nei tireociti.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Thyroperoxidase (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Tpo in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Tpo insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Tpo a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Thyroperoxidase.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Tpo per lo studio della segnalazione di Thyroperoxidase, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Tpo critici per la funzione di Thyroperoxidase
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Tpo per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal Thyroperoxidase CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal Thyroperoxidase CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Tpo. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal Thyroperoxidase Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR Thyroperoxidase (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Tpo per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Tpo definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.