Plásmido CRISPR de Activación (h) TGN38: sc-401763-ACT

TGOLN2 codifica TGN38, una glucoproteína transmembrana de tipo I enriquecida en la red trans-Golgi que actúa como factor de clasificación y tráfico para carga de membrana y secretora. Mediante motivos de direccionamiento citosólicos e interacciones con proteínas adaptadoras, TGN38 contribuye a la gemación de vesículas, al reciclaje de endosomas hacia la red trans-Golgi y al mantenimiento de la arquitectura del Golgi, influyendo así en la maduración de proteínas y en la organización espacial de receptores de señalización. Estos procesos conectan a TGOLN2 con vías centrales del transporte intracelular, el procesamiento de glucoproteínas y la secreción regulada. La desregulación del tráfico de membrana y de la homeostasis del Golgi se ha implicado en la invasión de células cancerosas, la neurodegeneración y alteraciones de la señalización inmunitaria, lo que convierte a TGOLN2 en un nodo útil para estudios mecanísticos de la dinámica de orgánulos y la proteostasis.

TGN38 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de TGOLN2 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

TGN38 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus TGOLN2 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional TGOLN2, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de TGN38. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo TGOLN2 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de TGN38 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía TGN38 en células tumorales con expresión de TGOLN2 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.