Plasmide CRISPR d'Activation (h2) TGF beta Receptor 3/TGFBR3: sc-401316-ACT-2

Le TGFBR3 humain (récepteur de type III du TGF‑β ; bêtaglycane) est un protéoglycane membranaire qui agit comme co‑récepteur en régulant la présentation des ligands et la spécificité de signalisation au sein de la superfamille du TGF‑β, notamment les TGF‑β et certains BMP. En modulant l’assemblage des complexes récepteurs et la disponibilité des ligands à la surface cellulaire, TGFBR3 influence des programmes transcriptionnels dépendants des SMAD ainsi que des voies non canoniques associées à la transition épithélio‑mésenchymateuse, au remodelage de la matrice extracellulaire et à la migration cellulaire. Une expression altérée de TGFBR3 ou son clivage (shedding) a été impliquée dans la dérégulation de la signalisation TGF‑β observée dans la fibrose et dans des modifications du microenvironnement liées au cancer, ce qui en fait une cible utile pour des études mécanistiques. Des réactifs dirigés contre TGFBR3 permettent d’explorer la diaphonie entre voies de signalisation, le trafic des récepteurs et le clivage du domaine ectodomaine, ainsi que des réponses spécifiques au contexte cellulaire dans des modèles de cellules humaines.

TGF beta Receptor 3/TGFBR3 Le plasmide d'activation CRISPR (h2) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de TGFBR3 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

TGF beta Receptor 3/TGFBR3 Le plasmide d'activation CRISPR (h2) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus TGFBR3 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription TGFBR3, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de TGF beta Receptor 3/TGFBR3. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus TGFBR3 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de TGF beta Receptor 3/TGFBR3 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie TGF beta Receptor 3/TGFBR3 dans les cellules tumorales présentant une expression de TGFBR3 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.