Partículas Lentivirales de Activación (h) TGF beta Receptor 1/TGFBR1: sc-400153-LAC

TGFBR1 codifica el receptor 1 del factor de crecimiento transformante beta (TGF-βRI/ALK5), una quinasa de serina/treonina que convierte las señales de los ligandos TGF-β en programas de señalización intracelular que controlan la proliferación, la diferenciación, la remodelación de la matriz extracelular y la modulación inmunitaria. Tras la unión del ligando a TGFBR2, TGFBR1 se activa para fosforilar SMAD2/3 y coordinar la transcripción canónica dependiente de SMAD4, además de activar vías no canónicas como MAPK, PI3K/AKT y la señalización de GTPasas tipo Rho. Estas vías regulan la transición epitelio-mesénquima, la activación de fibroblastos y los puntos de control del ciclo celular, lo que convierte a TGFBR1 en un nodo central de la homeostasis tisular. La señalización desregulada de TGFBR1 está implicada en la fibrosis y en diversos cánceres, y también se asocia a trastornos hereditarios del tejido conectivo y vasculares debido a una alteración del control de la vía de TGF-β.

Las partículas de activación lentiviral TGF beta Receptor 1/TGFBR1 (h) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de TGFBR1 en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral TGF beta Receptor 1/TGFBR1 (h) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción TGFBR1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de TGF beta Receptor 1/TGFBR1. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo TGFBR1 y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.