TGFβ2 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-423367

Panoramica

Tgfb2 codifica il transforming growth factor beta 2 (TGFβ2), una citochina secreta che segnala attraverso i recettori del TGFβ attivando programmi trascrizionali dipendenti da SMAD2/3 e interagendo con vie non canoniche, tra cui MAPK, PI3K/AKT e le Rho GTPasi. Nei tessuti murini, il TGFβ2 contribuisce alla regolazione della deposizione della matrice extracellulare, della proliferazione e differenziazione cellulare, della transizione epitelio-mesenchimale e della modulazione immunitaria all’interno del microambiente tissutale. Una segnalazione di TGFβ2 deregolata è associata a fibrosi anomala, angiogenesi alterata e cambiamenti del tono infiammatorio, con implicazioni per anomalie dello sviluppo e per la biologia dei tumori. Poiché gli esiti della via sono fortemente dipendenti dal contesto, Tgfb2 viene spesso studiato per capire come i segnali locali del TGFβ orientino il destino cellulare e il rimodellamento stromale.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO TGFβ2 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Tgfb2 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Tgfb2 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Tgfb2 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina TGFβ2.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Tgfb2 per lo studio della segnalazione di TGFβ2, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Tgfb2 critici per la funzione di TGFβ2
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Tgfb2 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal TGFβ2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal TGFβ2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Tgfb2. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal TGFβ2 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR TGFβ2 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Tgfb2 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Tgfb2 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.