TGase3 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-406800

Panoramica

TGM3 codifica la transglutaminasi 3 (TGase3), un enzima calcio-dipendente che catalizza la reticolazione delle proteine attraverso la formazione di legami isopeptidici ε-(γ-glutamil)lisina. TGase3 è nota soprattutto per il suo ruolo nei programmi di differenziazione terminale, contribuendo alla stabilizzazione del citoscheletro e degli assemblaggi proteici extracellulari durante la maturazione dell’epitelio e la formazione della barriera. La sua attività si interseca con le vie che regolano la differenziazione dei cheratinociti, la riparazione delle ferite e il rimodellamento delle proteine strutturali, collegando la reticolazione enzimatica all’omeostasi tissutale. Un’attività delle transglutaminasi deregolata e un’espressione alterata di TGM3 sono state associate a processi infiammatori e neoplastici nei tessuti epiteliali, a supporto dell’interesse nello studio di TGase3 in stati di differenziazione rilevanti per la malattia e nella biologia tumorale.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO TGase3 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene TGM3 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del TGM3 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto TGM3 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina TGase3.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di TGM3 per lo studio della segnalazione di TGase3, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni TGM3 critici per la funzione di TGase3
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di TGM3 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal TGase3 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal TGase3 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus TGM3. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal TGase3 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR TGase3 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia TGM3 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio TGM3 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.