TFIIH p62CRISPR激活质粒(h): sc-402239-ACT

GTF2H1 编码 TFIIH 复合体的 p62 亚基，这是 TFIIH 的核心组成部分，负责将 RNA 聚合酶 II 的转录起始与核苷酸切除修复（NER）相协调。TFIIH 通过与其他 TFIIH 亚基及修复因子的相互作用，整合启动子打开、转录起始位点选择以及 DNA 损伤识别/修复等过程，从而把基础转录与基因组维护连接起来。TFIIH 功能改变及 NER 缺陷与紫外线敏感性和转录偶联修复相关综合征有关，凸显 p62 在细胞应对基因毒性应激中的重要性。作为 TFIIH 内一种类似支架的因子，TFIIH p62 为解析转录调控与 DNA 修复通路之间的串扰提供了一个便于研究的关键节点。

TFIIH p62 CRISPR激活质粒（h）提供了一种靶向、非破坏性的方法，可在不改变底层DNA序列的情况下上调内源性GTF2H1的表达。

TFIIH p62 CRISPR激活质粒（h）是一个由三条质粒组成的协同激活介导（SAM）系统，旨在对人类细胞系中的GTF2H1基因座进行高效、位点特异性的转录上调。该系统以一种携带两个失活突变（D10A 和 N863A）的无催化活性的 Cas9（dCas9）为核心，这些突变消除了核酸酶活性，同时保留了 DNA 结合能力。该 dCas9 与强效转录激活因子 VP64 融合，并与用于筛选的布拉西定抗性基因共同表达。第二个质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白——这一二级激活复合物与dCas9-VP64协同作用，并携带潮霉素抗性基因。第三个质粒编码靶标特异性20 nt sgRNA，其与两个MS2 RNA适配体融合，这些适配体可将MS2-p65-HSF1复合物招募至激活位点，并携带嘌呤霉素抗性基因。这三个质粒按1:1:1的质量比递送，以确保系统所有组分的平衡表达。

在靶位点组装完成后，SAM复合物结合于GTF2H1转录起始位点上游约200 bp处，VP64、p65和HSF1在此协同作用，招募转录 machinery并驱动内源性TFIIH p62表达上调。与具有核酸酶活性的Cas9不同， dCas9不会引入双链断裂或修改基因组序列，从而保留了原生的GTF2H1位点，并能够研究内源性位点上依赖于TFIIH p62的转录反应，使其成为功能研究、靶基因鉴定以及在GTF2H1表达被沉默或降低的肿瘤细胞中模拟TFIIH p62通路恢复的宝贵工具。

仅供研究使用。不用于诊断或治疗。