TET1 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-400845-ACT

ヒトTET1（ten-eleven translocation methylcytosine dioxygenase 1）は、Fe(II)/2-オキソグルタル酸依存性ジオキシゲナーゼであり、5-メチルシトシンを5-ヒドロキシメチルシトシン（5hmC）およびさらに酸化された誘導体へと酸化し、能動的DNA脱メチル化を開始します。この活性を通じて、TET1は転写、クロマチン状態、発生に関わる遺伝子プログラムのエピジェネティック制御を形成し、系譜決定、ゲノム安定性、DNA損傷応答などの過程に影響を与えます。TET1依存的なDNAメチル化パターンの再構築は、転写ネットワークやクロマチン修飾因子と連携して、エンハンサーおよびプロモーター活性を制御します。TET1発現の異常や5hmC景観の変化は、がんにおける異常な転写状態や、神経発生および免疫調節に関連するエピジェネティック変化と関連づけられており、エピゲノム駆動性表現型の機構研究における重要な標的となっています。

TET1 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性TET1の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

TET1 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における TET1 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はTET1転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性TET1の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のTET1遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるTET1依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびTET1発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるTET1経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。