Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
TDP1 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-405057
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- TDP1 Il plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) è un pool di plasmidi, ciascuno dei quali codifica la nucleasi Cas9 e un RNA guida (gRNA) specifico per il bersaglio di 20 nt, progettato per la massima efficienza di knockout utilizzando sequenze derivate dalla libreria GeCKO v2
- Le sequenze gRNA indirizzano Cas9 a indurre rotture a doppio filamento (DSB) sito-specifiche nel locus genomico TDP1, con conseguente knockout genico tramite giunzione non omologa (NHEJ)
- I geni di resistenza alla puromicina e RFP sono fiancheggiati da siti LoxP, consentendo la rimozione dei marcatori di selezione tramite la ricombinasi Cre (Cre Vector: sc-418923) dopo aver stabilito linee cellulari knockout stabili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: TDP1 Antibody (C-3): sc-365674
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
TDP1 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h) | sc-405057 | 20 µg | $397.00 |
Panoramica
La tirosil-DNA fosfodiesterasi 1 (TDP1) è un enzima nucleare di riparazione del DNA che idrolizza i legami covalenti 3′-fosfotirosilici formati quando la topoisomerasi I rimane intrappolata sul DNA, oltre ad altri terminali 3′ del DNA bloccati. Coordinandosi con le vie di riparazione delle rotture a singolo filamento e di riparazione per escissione di basi, incluse le interazioni con PARP1, XRCC1 e la DNA ligasi III, TDP1 contribuisce a ripristinare estremità nuovamente ligabili e a preservare la stabilità del genoma durante lo stress di trascrizione e replicazione. La perdita o l’alterazione di TDP1 compromette la risoluzione degli addotti Top1-DNA, aumentando l’accumulo di rotture dei filamenti di DNA e di lesioni associate alla replicazione. La disfunzione di TDP1 è collegata a fenotipi neurodegenerativi come l’atassia spinocerebellare con neuropatia assonale ed è ampiamente rilevante per gli studi sulla tolleranza al danno al DNA e sulle risposte cellulari allo stress genotossico.
Il plasmide CRISPR/Cas9 KO TDP1 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene TDP1 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del TDP1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.
Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto TDP1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina TDP1.
Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di TDP1 per lo studio della segnalazione di TDP1, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.
Caratteristiche principali
- sgRNA mirati agli esoni TDP1 critici per la funzione di TDP1
Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di TDP1 per migliorare l'efficienza del knockout
Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione
Varianti di progettazione
CRISPR +/- HDR
- Gli gRNA codificati dal TDP1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal TDP1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus TDP1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
I costrutti donatori HDR codificati dal TDP1 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR TDP1 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia TDP1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio TDP1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.