Particules Lentivirales d'Activation (h2) TDO2: sc-402482-LAC-2

Le gène humain TDO2 (tryptophane 2,3‑dioxygénase) code une enzyme dépendante de l’hème qui catalyse la première étape, limitante en vitesse, du catabolisme du tryptophane via la voie des kynurénines, régulant ainsi la disponibilité cellulaire en tryptophane et la production en aval de métabolites immunomodulateurs et neuroactifs. L’activité de TDO2 relie la détection des nutriments et l’homéostasie métabolique hépatique à l’équilibre rédox et à des réseaux de signalisation influencés par les kynurénines, avec des conséquences sur la régulation immunitaire, les réponses au stress et le flux de précurseurs des neurotransmetteurs. Une expression dérégulée de TDO2 ou une altération de la production de la voie a été impliquée dans l’échappement immunitaire des cancers, des affections inflammatoires et des contextes de maladies neuropsychiatriques ou neurodégénératives où l’on observe un métabolisme tryptophane–kynurénine modifié. L’édition du gène TDO2 soutient des études mécanistiques de la reprogrammation métabolique, de la signalisation dépendante de la kynurénine et des interactions entre cellules tumorales, hépatocytes et cellules immunitaires dans des modèles cellulaires humains pertinents.

Les particules d'activation lentivirales TDO2 (h2) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de TDO2 dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales TDO2 (h2) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription TDO2, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de TDO2. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif TDO2 ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.