TDAG51 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-401042-ACT

PHLDA1 codifica TDAG51, uma proteína com domínio semelhante ao de homologia à pleckstrina, rapidamente induzida por estresse celular e pela sinalização de fatores de crescimento, e capaz de modular programas de apoptose, proliferação e diferenciação. TDAG51 participa de respostas transcricionais ao estresse e interage com vias como a sinalização MAPK e PI3K/AKT, influenciando a progressão do ciclo celular e decisões de sobrevivência. Alterações na expressão de PHLDA1 foram relatadas em múltiplos contextos tumorais e inflamatórios, onde frequentemente é utilizada como marcador de transições de estado celular e de fenótipos adaptativos ao estresse. Essas características fazem de TDAG51 um nó útil para investigar como a sinalização de estresse e programas de linhagem remodelam a expressão gênica e o destino celular em sistemas modelo humanos.

TDAG51 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de PHLDA1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

TDAG51 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus PHLDA1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição PHLDA1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de TDAG51. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus PHLDA1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de TDAG51 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via TDAG51 em células tumorais com expressão de PHLDA1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.