TCP-1 γ CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-403203

概要

CCT3は、ヒトのシャペロニン含有TCP-1サブユニットγ（TCP-1 γ）をコードしており、ATP依存的に幅広い基質（クライアント）タンパク質のフォールディングを促進する細胞質TRiC/CCT複合体の中核構成要素です。TRiC/CCTは、アクチンやチューブリンなどの細胞骨格タンパク質の成熟を補助するとともに、シグナル伝達因子や細胞周期制御因子のフォールディングおよび安定性にも影響することで、プロテオスタシス（タンパク質恒常性）を支えています。これらの役割を通じて、TCP-1 γは細胞骨格の組織化、タンパク質品質管理、増殖能に寄与し、シャペロニン機能の撹乱はプロテオトキシックストレスや増殖シグナルの変化と関連することが示されています。CCTサブユニットの発現異常は複数の疾患状況で報告されており、がん化に関わる経路や神経変性に伴うタンパク質ミスフォールディングに関連する経路の研究対象として重要性が支持されています。

TCP-1 γ CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるCCT3遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、CCT3内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、CCT3のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、TCP-1 γタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、TCP-1 γシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、CCT3欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• TCP-1 γの機能に不可欠なCCT3エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、CCT3ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• TCP-1 γ CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびTCP-1 γ CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、CCT3遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  TCP-1 γ HDRプラスミド（h）および TCP-1 γ HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはCCT3ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のCCT3標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。