TCEA3 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-408517-ACT

TCEA3は転写伸長因子A3をコードしており、RNAポリメラーゼIIに結合して転写産物の切断を促進し、逆行（バックトラック）した伸長複合体を救済することで、効率的なmRNA合成を支えるTFIISファミリータンパク質です。伸長の忠実性や再開を調節することで、TCEA3は転写の恒常性維持に寄与し、増殖・分化・ストレス応答に関連する細胞プログラムにも影響を及ぼします。Pol IIの伸長制御やTFIIS活性の破綻は、ゲノム安定性の異常や転写状態の変化と関連しており、がんや発生異常など複数の疾患状況で観察される所見に関与すると示唆されています。転写調節因子としてのTCEA3は、伸長因子がヒト細胞における遺伝子発現ネットワークや経路の出力をどのように調整するかを研究するうえで有用な標的です。

TCEA3 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性TCEA3の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

TCEA3 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における TCEA3 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はTCEA3転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性TCEA3の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のTCEA3遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるTCEA3依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびTCEA3発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるTCEA3経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。