Particules Lentivirales d'Activation (h) TBX3: sc-400754-LAC

TBX3 code un facteur de transcription de la famille T-box qui se lie à l’ADN via un domaine T-box conservé afin de réguler des programmes géniques du développement, les décisions de destin cellulaire et l’organisation des tissus. Dans les cellules humaines, TBX3 agit principalement comme un répresseur transcriptionnel ou comme un modulateur de l’expression génique dépendant du contexte, en intégrant des signaux qui influencent le contrôle du cycle cellulaire, la différenciation et la sénescence. Il interagit avec des voies qui gouvernent la spécification des lignages et la prolifération, notamment des réseaux liés à la signalisation Wnt/β-caténine et aux points de contrôle associés à p53. Une expression dérégulée de TBX3 a été associée à des troubles congénitaux du développement et a été étudiée en biologie du cancer pour ses rôles dans la prolifération, l’invasion et des états transcriptionnels de type « stem ».

Les particules d'activation lentivirales TBX3 (h) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de TBX3 dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales TBX3 (h) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription TBX3, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de TBX3. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif TBX3 ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.