TBK1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-425191-ACT

O gene murino Tbk1 codifica a quinase 1 ligante de TANK (TBK1), uma quinase de serina/treonina que integra a sinalização da imunidade inata a jusante de recetores de reconhecimento de padrões. A TBK1 fosforila IRF3/IRF7 e modula respostas associadas ao NF-κB para promover a produção de interferão do tipo I, ao mesmo tempo que se cruza com a autofagia e a mitofagia através de sinalização dependente de adaptadores. Em sistemas murinos, a atividade alterada de TBK1 é usada para estudar a dinâmica da sinalização inflamatória, as interações hospedeiro–patógeno e a regulação de respostas ao stress celular. Vias desreguladas ligadas à TBK1 são frequentemente investigadas em contextos relevantes para doenças que envolvem inflamação crónica, neuroinflamação e disfunção da imunidade inata.

TBK1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Tbk1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

TBK1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Tbk1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Tbk1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de TBK1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Tbk1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de TBK1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via TBK1 em células tumorais com expressão de Tbk1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.