Plásmido CRISPR de Activación (m) TBC1D15: sc-426147-ACT

Tbc1d15 codifica TBC1D15, una proteína activadora de la GTPasa Rab (RabGAP) que regula el tráfico de membranas y la dinámica de los orgánulos, con funciones destacadas en el transporte endosomal y en procesos asociados a las mitocondrias. Al modular el movimiento de vesículas dependiente de Rab y la morfología mitocondrial, TBC1D15 ayuda a coordinar el metabolismo celular, las respuestas al estrés y la eliminación de componentes dañados. El tráfico alterado y la homeostasis mitocondrial desregulada son rasgos recurrentes en la neurodegeneración, la disfunción metabólica y la biología del cáncer, lo que convierte a Tbc1d15 en ratón en un nodo útil para estudios a nivel de vías. En sistemas murinos, la alteración de la expresión de Tbc1d15 permite la exploración mecanística del control de calidad mitocondrial, la señalización vinculada a la mitofagia y los fenotipos de transporte intracelular.

TBC1D15 El plásmido de activación CRISPR (m) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de Tbc1d15 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

TBC1D15 El plásmido de activación CRISPR (m) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus Tbc1d15 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional Tbc1d15, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de TBC1D15. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo Tbc1d15 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de TBC1D15 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía TBC1D15 en células tumorales con expresión de Tbc1d15 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.