TAZ Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-430168-ACT

O gene murino Wwtr1 codifica o coativador transcricional TAZ (WWTR1), um efetor-chave da via de sinalização Hippo que conecta pistas mecânicas e a polaridade celular a programas de expressão gênica que controlam proliferação, sobrevivência e comprometimento de linhagem. O TAZ transita entre o citoplasma e o núcleo em resposta à fosforilação mediada por LATS1/2 e integra sinais de GPCR, WNT/β-catenina e tensão do citoesqueleto para modular a transcrição dependente de TEAD. No desenvolvimento e na homeostase tecidual, Wwtr1 contribui para o controle do tamanho de órgãos, regeneração e comportamento de células-tronco/progenitoras, enquanto a atividade desregulada de TAZ está associada a crescimento aberrante, programas transcricionais relacionados à fibrose e fenótipos oncogênicos em modelos experimentais. Essas funções fazem de Wwtr1/TAZ um alvo comum para estudar mecanotransdução, plasticidade epitélio–mesênquima e redes transcricionais específicas de contexto.

TAZ O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Wwtr1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

TAZ O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Wwtr1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Wwtr1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de TAZ. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Wwtr1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de TAZ no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via TAZ em células tumorais com expressão de Wwtr1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.