Plásmido CRISPR de Activación (h) Tau: sc-400136-ACT

El gen humano **MAPT** codifica la proteína tau asociada a microtúbulos, un factor predominantemente neuronal que se une a los microtúbulos y los estabiliza para sostener el transporte axonal, el crecimiento de neuritas y la organización del citoesqueleto. La función de tau está regulada por modificaciones postraduccionales, en particular la fosforilación, que modula su afinidad por los microtúbulos e influye en la dinámica del citoesqueleto y el tráfico intracelular. La desregulación de la expresión de **MAPT** y de la homeostasis de tau se asocia a procesos neurodegenerativos y a la agregación proteica observada en las tauopatías, incluidas la enfermedad de Alzheimer y la demencia frontotemporal. Por ello, **MAPT** se estudia ampliamente en vías que controlan la estabilidad de los microtúbulos, la integridad sináptica, la proteostasis y las respuestas al estrés asociadas a la neuroinflamación.

Tau El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de MAPT sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Tau El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus MAPT en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional MAPT, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Tau. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo MAPT y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Tau en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Tau en células tumorales con expresión de MAPT silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.