Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
TAP Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-424683
- Specie Target: mouse
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- TAP Il plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) è un pool di plasmidi, ciascuno dei quali codifica la nucleasi Cas9 e un RNA guida (gRNA) specifico per il bersaglio di 20 nt, progettato per la massima efficienza di knockout utilizzando sequenze derivate dalla libreria GeCKO v2
- Le sequenze gRNA indirizzano Cas9 a indurre rotture a doppio filamento (DSB) sito-specifiche nel locus genomico TAP, con conseguente knockout genico tramite giunzione non omologa (NHEJ)
- I geni di resistenza alla puromicina e RFP sono fiancheggiati da siti LoxP, consentendo la rimozione dei marcatori di selezione tramite la ricombinasi Cre (Cre Vector: sc-418923) dopo aver stabilito linee cellulari knockout stabili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: TAP Antibody (53H8): sc-32319
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
TAP Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m) | sc-424683 | 20 µg | $397.00 |
Panoramica
Il gene murino Nxf1 codifica TAP, un recettore di esportazione legante l’RNA conservato, che collabora con NXT1 per promuovere il trasporto della maggior parte degli mRNA dal nucleo al citoplasma attraverso il complesso del poro nucleare. TAP riconosce particelle ribonucleoproteiche messaggero mature tramite interazioni con complessi adattatori come TREX e contribuisce ad accoppiare trascrizione, splicing e processamento dell’estremità 3′ con l’esportazione nucleare. Controllando la disponibilità dei trascritti per la traduzione, Nxf1 influenza la proteostasi, la progressione del ciclo cellulare e i programmi di espressione genica responsivi allo stress. L’alterazione dei macchinari di esportazione dell’mRNA è associata a una disregolazione dell’espressione genica in ambito oncologico e a meccanismi di malattie neurosviluppative e neurodegenerative, rendendo Nxf1 un nodo utile per lo studio di patologie legate al metabolismo dell’RNA.
Il plasmide CRISPR/Cas9 KO TAP (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Nxf1 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Nxf1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.
Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Nxf1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina TAP.
Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Nxf1 per lo studio della segnalazione di TAP, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.
Caratteristiche principali
- sgRNA mirati agli esoni Nxf1 critici per la funzione di TAP
Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Nxf1 per migliorare l'efficienza del knockout
Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione
Varianti di progettazione
CRISPR +/- HDR
- Gli gRNA codificati dal TAP CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal TAP CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Nxf1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
I costrutti donatori HDR codificati dal TAP Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR TAP (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Nxf1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Nxf1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.