TALK-1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-406360

概要

KCNK16 は TALK-1（K2P16.1）をコードしており、TALK-1 は二孔型ドメイン（K2P）カリウムチャネルとして、背景 K⁺ コンダクタンスに寄与し、興奮性細胞および分泌細胞における静止膜電位を規定します。膜の興奮性を調節することにより、TALK-1 は電位依存性の Ca²⁺ 流入と、その下流にある Ca²⁺ 連関シグナル伝達経路に影響を与え、刺激—分泌連関や細胞ストレス応答を形作ります。このチャネルは膵島で高発現しており、K⁺ フラックスの変化は β 細胞の電気活動やインスリン分泌動態を調節し得ます。遺伝学的・機能的研究により KCNK16/TALK-1 活性は代謝関連形質と関連づけられており、糖尿病に関連するシグナル伝達やイオンチャネル生理の機序研究において重要です。

TALK-1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるKCNK16遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、KCNK16内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、KCNK16のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、TALK-1タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、TALK-1シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、KCNK16欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• TALK-1の機能に不可欠なKCNK16エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、KCNK16ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• TALK-1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびTALK-1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、KCNK16遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  TALK-1 HDRプラスミド（h）および TALK-1 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはKCNK16ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のKCNK16標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。