Talin CRISPR Activation Plasmid (h): sc-401342-ACT

Das humane TLN1 kodiert Talin, einen zytoskelettalen Adapter, der die zytoplasmatischen Schwänze von β-Integrinen mit F-Aktin verbindet und so die Integrinaktivierung, den Aufbau fokaler Adhäsionen und die Mechanotransduktion fördert. Durch das Zusammenspiel mit der fokalen Adhäsionskinase (FAK), Src-Familien-Signalwegen, Rho-GTPase-abhängigem Aktin-Remodeling und PI3K–AKT-Signalwegen trägt Talin dazu bei, Zelladhäsion, Ausbreitung, Migration und Überleben als Reaktion auf Signale aus der extrazellulären Matrix zu regulieren. Eine veränderte TLN1-Expression oder talinabhängige Adhäsionsdynamik wurde mit einer fehlregulierten Invasion und metastatischem Verhalten sowie mit Defekten in Hämostase und Immunzell-Trafficking in Verbindung gebracht, die von der Integrinsignalisierung abhängen. Diese Eigenschaften machen TLN1 zu einem häufig genutzten Knotenpunkt für die Untersuchung adhäsionsabhängiger Signalnetzwerke und kraftsensitiver Zell-Matrix-Interaktionen.

Talin-1 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen TLN1-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

Talin-1 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des TLN1-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der TLN1-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen Talin-1-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native TLN1-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von Talin-1-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des Talin-1-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem TLN1-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.