Plasmide Double Nickase (h) Tafazzin: sc-403588-NIC

TAZ code la tafazzine, une acyltransférase associée à la membrane interne mitochondriale qui remodèle la cardiolipine afin de maintenir la composition adéquate en chaînes acyles, indispensable à l’organisation de la chaîne respiratoire et à une phosphorylation oxydative efficace. Par la maturation de la cardiolipine, la tafazzine soutient l’architecture des crêtes mitochondriales, la dynamique membranaire et la stabilité des supercomplexes protéiques impliqués dans le transport d’électrons. Une perturbation de TAZ dérègle l’homéostasie des phospholipides, augmente la monolysocardiolipine et peut orienter la bioénergétique cellulaire vers des réponses au stress liées à une altération de la fonction mitochondriale. Le dysfonctionnement de TAZ est fortement associé au syndrome de Barth et est fréquemment étudié dans le contexte de la cardiomyopathie, de la myopathie squelettique, de la neutropénie et, plus largement, de défauts du remodelage lipidique mitochondrial.

Tafazzin Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus TAZ dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de TAZ. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de TAZ. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de TAZ.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.