T1R2 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h): sc-402555

Visão geral

TAS1R2 codifica a subunidade do recetor do sabor doce T1R2, um GPCR de classe C que forma um heterodímero com o T1R3 para detetar açúcares e adoçantes e acoplar a ligação do ligando à sinalização intracelular por segundos mensageiros. Para além das células gustativas, foi descrita sinalização T1R2/T1R3 em contextos enteroendócrinos e noutros contextos quimiossensoriais, onde pode influenciar a deteção de nutrientes e respostas hormonais ou metabólicas a jusante. A ativação do recetor está geralmente associada a vias mediadas por GPCR envolvendo proteínas G, PLCβ2, mobilização de Ca²⁺ intracelular e, dependendo do tipo celular, programas de MAPK ou de transcrição a jusante. Alterações na expressão de TAS1R2 ou variantes têm sido investigadas em relação a fenótipos metabólicos, comportamento alimentar e homeostase da glicose, sustentando a sua relevância para estudos de redes de sinalização responsivas a nutrientes.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO T1R2 (h) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene TAS1R2 em linhas celulares human. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do TAS1R2, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do TAS1R2 na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína T1R2.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de TAS1R2 para a investigação da sinalização de T1R2, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) TAS1R2 críticos para a função T1R2
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos TAS1R2 para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo T1R2 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) e pelo T1R2 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h2) têm como alvo locais distintos dentro do locus TAS1R2. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo T1R2 Plasmídeo HDR (h) e o Plasmídeo HDR T1R2 (h2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia TAS1R2 para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo TAS1R2 definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.