Tβ-4 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-417057-ACT

ヒトTMSB4Xにコードされるチモシンβ4（Thymosin beta-4）は、進化的に高度に保存されたアクチン隔離ペプチドであり、Gアクチンの利用可能性を調節して、細胞骨格のリモデリング、細胞運動性、ならびにストレス応答性の細胞形態変化を支えます。アクチン動態を調整することで、遊走、接着、創傷に伴う細胞応答などの過程に影響を与え、炎症や組織リモデリングを制御する経路とも関連づけられています。TMSB4X発現の変化は、腫瘍進展、血管新生シグナル、線維化あるいは炎症状態など、さまざまな状況で報告されており、細胞骨格依存性の表現型を機構的に研究するうえで有用な結節点となります。広く発現する細胞骨格制御因子として、TMSB4Xは、アクチン恒常性が転写プログラムや細胞微小環境からのシグナルとどのように接続しているかを解析するための、扱いやすい標的を提供します。

Tβ-4 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性TMSB4Xの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

Tβ-4 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における TMSB4X 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はTMSB4X転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性Tβ-4の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のTMSB4X遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるTβ-4依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびTMSB4X発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるTβ-4経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。