Tβ-10 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-422496

Panoramica

Tmsb10 codifica la timosina beta-10 (Tβ-10), una piccola proteina che sequestra l’actina e regola l’equilibrio tra G-actina e F-actina, favorendo un rapido rimodellamento del citoscheletro. Influenzando la dinamica di polimerizzazione dell’actina, Tβ-10 contribuisce a processi quali il controllo della forma cellulare, la migrazione, l’adesione e la citocinesi, con effetti a valle su programmi di segnalazione legati alla motilità e alle risposte allo stress. Un’alterata espressione di TMSB10/Tβ-10 è stata riportata in diversi contesti patologici, spesso correlando con variazioni della proliferazione e del comportamento invasivo. Nei sistemi murini, Tmsb10 rappresenta quindi un utile punto di partenza per analizzare fenotipi cellulari guidati dall’actina e la loro relazione con vie associate alla trasformazione.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Tβ-10 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Tmsb10 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Tmsb10 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Tmsb10 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Tβ-10.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Tmsb10 per lo studio della segnalazione di Tβ-10, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Tmsb10 critici per la funzione di Tβ-10
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Tmsb10 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal Tβ-10 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal Tβ-10 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Tmsb10. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal Tβ-10 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR Tβ-10 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Tmsb10 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Tmsb10 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.