Plasmide Double Nickase (h) SYP/Synaptophysin: sc-400487-NIC

SYP code la synaptophysine, une glycoprotéine transmembranaire intégrale des vésicules synaptiques extrêmement abondante, qui soutient la biogenèse des vésicules présynaptiques, leur trafic et la libération de neurotransmetteurs dépendante du Ca²⁺. La synaptophysine participe au recyclage des vésicules ainsi qu’au couplage endocytose/exocytose via des interactions avec des protéines vésiculaires telles que la synaptobrévine/VAMP2, ce qui l’associe à la transmission synaptique et à l’activité des réseaux neuronaux. Comme SYP est largement utilisé comme marqueur de la densité synaptique et de l’intégrité présynaptique, les altérations de son expression ou de sa distribution sont fréquemment examinées dans les études sur la neurodégénérescence, les troubles du neurodéveloppement et le dysfonctionnement synaptique. Sa localisation associée aux vésicules le rend également pertinent pour l’étude de la différenciation neuronale, de la plasticité et des modifications des circuits induites par des voies liées aux maladies.

SYP/Synaptophysin Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus SYP dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de SYP. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de SYP. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de SYP.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.