Syntaphilin CRISPR Activationプラスミド (h): sc-403784-ACT

ヒトSNPHは、ミトコンドリアを固定するタンパク質であるシンタフィリンをコードしており、微小管細胞骨格に結合させることで軸索ミトコンドリアを不動化します。ミトコンドリアの運動性を制限することにより、シンタフィリンはシナプス前部位における局所的なATP利用可能量とCa²⁺緩衝能の調節に寄与し、ミトコンドリア動態をシナプス維持および活動依存的可塑性と結び付けます。SNPHの機能は、軸索輸送、ミトコンドリア品質管理、神経細胞のストレス応答を制御する経路と交差しており、ミトコンドリア分布や生体エネルギー恒常性が乱れる神経変性などの疾患研究において重要です。ミトコンドリア輸送の制御異常は、神経損傷やプロテイノパチーのモデルで頻繁に検討されており、SNPHは神経回路の脆弱性を調べるための機構的な結節点として位置付けられます。

Syntaphilin CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性SNPHの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

Syntaphilin CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における SNPH 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はSNPH転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性Syntaphilinの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のSNPH遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるSyntaphilin依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびSNPH発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるSyntaphilin経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。