Synaptotagmin III CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-423245

概要

マウスのSyt3は、膜にアンカーされたC2ドメインタンパク質であるシナプトタグミンIIIをコードしており、Ca2+センサーとして機能して、カルシウム流入を制御性の小胞輸送および膜融合に結び付けます。シナプトタグミンIIIはシナプス小胞のエキソサイトーシスとエンドサイトーシス後のリサイクリングに関与し、神経伝達物質放出の速度論や短期シナプス可塑性の形成に寄与します。Ca2+依存的にリン脂質やSNARE関連機構と相互作用することで、神経細胞やその他の分泌細胞における活動依存的な輸送経路に影響を与えます。シナプトタグミンファミリーのシグナル伝達の変化は、神経発達および神経変性に関連する表現型に関わる機序と結び付けられており、Syt3はシナプス機能障害を解析するための標的として有用であることが示唆されます。

Synaptotagmin III CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるSyt3遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Syt3内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Syt3のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、Synaptotagmin IIIタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、Synaptotagmin IIIシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Syt3欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• Synaptotagmin IIIの機能に不可欠なSyt3エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Syt3ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• Synaptotagmin III CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびSynaptotagmin III CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Syt3遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  Synaptotagmin III HDRプラスミド（m）および Synaptotagmin III HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはSyt3ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のSyt3標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。