Synaptotagmin III CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-423245

Übersicht

Das murine Syt3 kodiert Synaptotagmin III, ein membranverankertes C2-Domänen-Protein, das als Ca2+-Sensor fungiert und den Calciumeinstrom mit reguliertem Vesikeltransport und Membranfusion koppelt. Synaptotagmin III trägt zur Exozytose synaptischer Vesikel und zum endozytotischen Recycling bei und hilft so, die Kinetik der Neurotransmitterfreisetzung und die kurzfristige synaptische Plastizität zu formen. Über Ca2+-abhängige Interaktionen mit Phospholipiden und SNARE-assoziierten Komponenten beeinflusst es aktivitätsabhängige Transportwege in Neuronen und anderen sekretorischen Zelltypen. Veränderte Signalwege der Synaptotagmin-Familie wurden mit Mechanismen in Verbindung gebracht, die für neuroentwicklungsbedingte und neurodegenerative Phänotypen relevant sind, was Syt3 als Ziel zur Untersuchung synaptischer Dysfunktion stützt.

Das Synaptotagmin III CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Syt3-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Syt3-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Syt3 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die Synaptotagmin III-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Syt3-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der Synaptotagmin III-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Syt3-Exone abzielen, die für die Synaptotagmin III-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Syt3-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom Synaptotagmin III CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom Synaptotagmin III CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Syt3-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das Synaptotagmin III HDR-Plasmid (m) und Synaptotagmin III HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Syt3-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Syt3-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.