Synaptojanin 2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-423241

概要

マウスSynj2は、PI(4,5)P2および関連するホスホイノシチドを脱リン酸化するポリホスホイノシチドホスファターゼであるシナプトジャニン2をコードしており、膜輸送とシグナル伝達の協調的制御に関与します。シナプトジャニン2は、クラスリン介在性エンドサイトーシス、エンドソームのリサイクリング、アクチン細胞骨格のリモデリングに機能し、その結果、受容体の内在化やホスホイノシチド依存性経路の動態に影響を与えます。ホスホイノシチドプールの調節を通じて、細胞移動、神経突起の伸長、小胞のターンオーバーといった細胞プロセスにも影響します。ホスホイノシチド代謝とエンドサイトーシス制御の破綻は、神経生物学およびがんに関連したシグナル伝達の適応に関与すると示唆されており、Synj2は膜恒常性とシグナル恒常性の機構研究に有用な標的となります。

Synaptojanin 2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるSynj2遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Synj2内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Synj2のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、Synaptojanin 2タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、Synaptojanin 2シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Synj2欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• Synaptojanin 2の機能に不可欠なSynj2エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Synj2ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• Synaptojanin 2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびSynaptojanin 2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Synj2遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  Synaptojanin 2 HDRプラスミド（m）および Synaptojanin 2 HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはSynj2ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のSynj2標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。