SUV39H1 CRISPR Activationプラスミド (m): sc-423224-ACT

マウスSuv39h1は、SETドメインをもつヒストンメチル化酵素SUV39H1をコードしており、H3K9のトリメチル化（H3K9me3）を触媒してヘテロクロマチン形成と転写抑制を促進します。SUV39H1はHP1タンパク質やDNAメチル化機構と協調して、セントロメア周辺反復配列におけるエピジェネティックなサイレンシングを安定化させ、ゲノムの完全性を制御し、適切な染色体分配を保証します。クロマチン凝縮の制御を介して、SUV39H1は細胞周期の進行、DNA損傷応答、ならびに系統特異的な遺伝子プログラムに影響を与えます。SUV39H1活性の破綻やH3K9me3ランドスケープの変化は、がん生物学、細胞老化、神経疾患モデルで観察される異常な転写状態と関連づけられており、そのためSuv39h1はエピジェネティクス／クロマチン研究で一般的な標的となっています。

SUV39H1 CRISPR活性化プラスミド（m）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性Suv39h1の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

SUV39H1 CRISPR 活性化プラスミド (m) は、ヒト細胞株における Suv39h1 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はSuv39h1転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性SUV39H1の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のSuv39h1遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるSUV39H1依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびSuv39h1発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるSUV39H1経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。