SUV39H1 CRISPR Activation Plasmid (m): sc-423224-ACT

Das Mausgen *Suv39h1* kodiert SUV39H1, eine SET-Domänen-Histonmethyltransferase, die die Trimethylierung von H3K9 katalysiert und dadurch die Bildung von Heterochromatin sowie die transkriptionelle Repression fördert. SUV39H1 arbeitet mit HP1-Proteinen und der DNA-Methylierungsmaschinerie zusammen, um epigenetische Stilllegung an perizentromerischen Wiederholungssequenzen zu stabilisieren, die Genomintegrität zu regulieren und eine korrekte Chromosomensegregation sicherzustellen. Über die Kontrolle der Chromatinkondensation beeinflusst SUV39H1 den Zellzyklusverlauf, DNA-Schadensantworten und linien-/gewebespezifische Genprogramme. Eine dysregulierte SUV39H1-Aktivität und veränderte H3K9me3-Landschaften wurden mit aberranten Transkriptionszuständen in der Krebsbiologie, der Seneszenz und in Modellen neurologischer Erkrankungen in Verbindung gebracht, wodurch *Suv39h1* ein häufiges Ziel in der Epigenetik- und Chromatinforschung ist.

SUV39H1 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (m) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen Suv39h1-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

SUV39H1 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (m) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des Suv39h1-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der Suv39h1-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen SUV39H1-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native Suv39h1-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von SUV39H1-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des SUV39H1-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem Suv39h1-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.