Superoxide Dismutase 1/SOD1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-423069-ACT

O gene **Sod1** de camundongo codifica a superóxido dismutase 1 (**SOD1**), uma metaloenzima **Cu/Zn** predominantemente citosólica que catalisa a dismutação do ânion superóxido em peróxido de hidrogênio e oxigênio, limitando assim o dano oxidativo a proteínas, lipídios e ácidos nucleicos. Ao modular a homeostase redox celular, a SOD1 influencia a função mitocondrial, o equilíbrio das redes antioxidantes (por exemplo, o processamento de peróxidos dependente de peroxirredoxina e catalase) e vias de sinalização responsivas ao estresse, incluindo **MAPK** e **NF-κB**. Alterações na atividade da SOD1 modificam o fluxo de espécies reativas de oxigênio e podem afetar a proteostase, a neuroinflamação e a sobrevivência celular sob estresse oxidativo. A biologia da SOD1 é amplamente estudada no contexto da desregulação redox e de modelos de neurodegeneração, bem como de fenótipos mais amplos associados ao estresse oxidativo em metabolismo e envelhecimento.

Superoxide Dismutase 1/SOD1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Sod1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Superoxide Dismutase 1/SOD1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Sod1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Sod1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Superoxide Dismutase 1/SOD1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Sod1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Superoxide Dismutase 1/SOD1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Superoxide Dismutase 1/SOD1 em células tumorais com expressão de Sod1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.