Plásmido Doble Nickase (m2) Sulf-2: sc-428206-NIC-2

El gen Sulf2 de ratón codifica la heparán sulfato 6‑O‑endosulfatasa 2 extracelular (Sulf‑2), una enzima secretada que remodela el heparán sulfato de la superficie celular y de la matriz al eliminar grupos 6‑O‑sulfato, modulando así la disponibilidad de ligandos y las interacciones con receptores. Al modificar los patrones de sulfatación del heparán sulfato, Sulf‑2 influye en ejes de señalización clave, incluidos FGF, WNT, Hedgehog, BMP y los gradientes de quimiocinas, dando forma a procesos como la migración celular, el patrón tisular, la angiogénesis y las respuestas inflamatorias. La actividad desregulada de SULF2 se ha vinculado con dinámicas alteradas de la matriz extracelular y una señalización aberrante en contextos como la biología tumoral, la fibrosis y fenotipos del neurodesarrollo, lo que convierte a Sulf2 en una diana útil para estudios mecanísticos de la señalización dependiente de glicosaminoglicanos. La edición génica de Sulf2 en modelos murinos permite diseccionar funcionalmente el ajuste fino de vías dependiente de la sulfatación, la regulación del nicho extracelular y las interacciones microambientales relevantes para enfermedad, tanto in vitro como in vivo.

Sulf-2 El plásmido de doble nicasa (m2) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus Sulf2 en líneas celulares mouse. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de Sulf2. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de Sulf2. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con Sulf2 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.