STAU1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-402630-ACT

A STAU1 (Staufen1) humana é uma proteína ligadora de RNA de dupla fita que regula a expressão gênica pós-transcricional ao controlar o transporte, a localização, a tradução e a degradação de mRNAs. Ela é um fator central na degradação de mRNA mediada por Staufen (SMD), coordenando interações com complexos ribonucleoproteicos para moldar a estabilidade dos transcritos e a produção do proteoma. A STAU1 também conecta o metabolismo de RNA às respostas ao estresse celular, à organização do citoesqueleto e à progressão do ciclo celular por meio de seus papéis na dinâmica de grânulos de RNA e no controle traducional. A atividade desregulada de STAU1 tem sido associada a alterações na homeostase de RNA observadas em fenótipos relacionados ao câncer e à neurobiologia, apoiando seu uso como um nó mecanístico para o estudo de redes regulatórias de genes relevantes para doenças.

STAU1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de STAU1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

STAU1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus STAU1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição STAU1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de STAU1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus STAU1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de STAU1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via STAU1 em células tumorais com expressão de STAU1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.