Plásmido Doble Nickase (m) Stat5b: sc-423179-NIC

Stat5b de ratón (transductor de señales y activador de la transcripción 5B) es un factor de transcripción sensible a citocinas que conecta las quinasas JAK asociadas a receptores con cambios rápidos en la expresión génica. Tras su fosforilación, STAT5B dimeriza y se trasloca al núcleo para regular programas que controlan el desarrollo de linfocitos, la diferenciación mieloide, el metabolismo y la señalización de factores de crecimiento, con funciones destacadas aguas abajo de las citocinas de la familia de IL‑2 y de la hormona del crecimiento. La actividad de Stat5b se entrecruza con circuitos de retroalimentación de la vía JAK–STAT, el remodelado de la cromatina y el control transcripcional de genes de supervivencia y del ciclo celular. La señalización desregulada de STAT5B se estudia con frecuencia en modelos de desequilibrio inmunitario, inflamación y transformación hematopoyética, donde cambios en las salidas transcripcionales pueden modificar el destino de linaje y la capacidad proliferativa.

Stat5b El plásmido de doble nicasa (m) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus Stat5b en líneas celulares mouse. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de Stat5b. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de Stat5b. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con Stat5b alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.