SPRR2G CRISPR Activation Plasmid (h): sc-416907-ACT

SPRR2G (small proline-rich protein 2G) ist ein Vorläuferprotein der verhornten Hülle (cornified envelope), das überwiegend in mehrschichtigen Epithelien exprimiert wird. Dort trägt es zur Barrierebildung bei, indem es während der terminalen Keratinozytendifferenzierung als Substrat für die durch Transglutaminasen vermittelte Quervernetzung dient. Es wirkt in Programmen der epidermalen Differenzierung und Keratinisierung, die mit der Umgestaltung des Zytoskeletts und stressresponsiven epithelialen Gennetzwerken koordiniert sind. Eine veränderte Expression von Mitgliedern der SPRR-Familie wird häufig bei barriere-störenden entzündlichen Hauterkrankungen und bei epithelialer Hyperproliferation beobachtet, und SPRR2G wird als molekularer Indikator für den Differenzierungszustand und das Gewebe-Remodeling verwendet. Diese Eigenschaften machen SPRR2G relevant für die Untersuchung der epithelialen Homöostase, von Verletzungsantworten und krankheitsassoziierten Veränderungen in Differenzierungspfaden.

SPRR2G Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen SPRR2G-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

SPRR2G Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des SPRR2G-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der SPRR2G-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen SPRR2G-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native SPRR2G-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von SPRR2G-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des SPRR2G-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem SPRR2G-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.