SPEN CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-406083

概要

SPEN（SHARPとも呼ばれる）は、配列特異的なDNA結合パートナーおよび長鎖ノンコーディングRNA（lncRNA）をクロマチン修飾複合体へとつなぐ、大型の核内RNA結合性転写共役因子をコードしています。SPENはSMRT/HDACや関連するリプレッサーとの相互作用を介して、XIST依存的なX染色体不活化を含む転写サイレンシングプログラムに寄与し、系譜特異的な遺伝子発現にも影響を与えます。さらにSPENは、シグナル応答性の転写出力を調節し、Notch関連の制御との関係や、発生および免疫関連経路にまたがるより広範なエピジェネティック制御との関連が報告されています。SPENの機能または発現の異常は、複数の疾患状況で観察される分化状態の変化や転写ネットワークの再配線に関与すると示唆されており、遺伝子制御研究における機構的ハブとしての有用性を支持しています。

SPEN CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるSPEN遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、SPEN内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、SPENのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、SPENタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、SPENシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、SPEN欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• SPENの機能に不可欠なSPENエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、SPENゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• SPEN CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびSPEN CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、SPEN遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  SPEN HDRプラスミド（h）および SPEN HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはSPENホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のSPEN標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。