spectrin α II CRISPR Activation Plasmid (h): sc-400910-ACT

SPTAN1 kodiert humanes Spektrin α II, einen zentralen Bestandteil des Spektrin–Aktin-Membranskeletts, das die Integrität der Plasmamembran stützt und die Architektur des kortikalen Zytoskeletts organisiert. Spektrin α II bildet mit β‑Spektrinen Heterotetramere, die als Gerüst für Ionenkanäle und Signalkomplexe dienen und so zu Prozessen wie Zelladhäsion, Mechanotransduktion und der Aufrechterhaltung der Zellpolarität beitragen. Über seine strukturellen und adaptorischen Funktionen beeinflusst SPTAN1 zytoskelettabhängige Signalwege, darunter Membrantransport, Stabilität von Zellkontakten und Zellmigration. Eine Fehlregulation von Spektrin-Netzwerken wurde mit veränderter neuronaler und epithelialer Homöostase in Verbindung gebracht und ist relevant für Studien zu Zytoskelettstörungen sowie zu krankheitsassoziierten Störungen der Signalübertragung.

spectrin α II Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen SPTAN1-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

spectrin α II Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des SPTAN1-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der SPTAN1-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen spectrin α II-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native SPTAN1-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von spectrin α II-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des spectrin α II-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem SPTAN1-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.