Plásmido Doble Nickase (h) Spartin: sc-407769-NIC

SPG20 codifica Spartin, una proteína citosólica implicada en el tráfico endosomal y la dinámica de membranas mediante interacciones con componentes de la maquinaria ESCRT y vías de clasificación dependientes de ubiquitina. Spartin se ha vinculado a la regulación del recambio de gotículas lipídicas y a la homeostasis mitocondrial, integrándose en procesos celulares de control de calidad que influyen en la proteostasis y la función de los orgánulos. La alteración de SPG20 se asocia con el síndrome de Troyer, una paraplejía espástica hereditaria complicada caracterizada por afectación del neurodesarrollo y del sistema motor, lo que convierte a Spartin en un punto de interés para estudiar mecanismos de tráfico y respuesta al estrés relevantes en neuronas. En modelos celulares, la perturbación de SPG20 puede utilizarse para investigar cómo los cambios en el enrutamiento endolisosomal y el mantenimiento de orgánulos repercuten en la señalización y la viabilidad celular.

Spartin El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus SPG20 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de SPG20. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de SPG20. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con SPG20 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.