SorLA Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-403088-ACT

Il gene umano **SORL1** codifica **SorLA**, un recettore di smistamento con dominio VPS10 che regola il traffico endosomiale e il riciclo dei recettori nei neuroni e in altri tipi cellulari. SorLA modula l’instradamento intracellulare della **proteina precursore dell’amiloide (APP)** e influenza la sua elaborazione amiloidogenica dirigendo il carico tra la rete trans-Golgi, gli endosomi e la superficie cellulare. Grazie al suo ruolo nel trasporto vescicolare e nel turnover associato ai lisosomi, SorLA contribuisce alla proteostasi, alla funzione sinaptica e alla gestione dei recettori lipidici, collegando la disregolazione di SORL1 alla genetica della malattia di Alzheimer e a difetti endosomiali associati alla neurodegenerazione. L’alterata attività di SorLA è quindi ampiamente studiata nei percorsi che governano l’elaborazione di APP, la maturazione degli endosomi e l’omeostasi neuronale.

SorLA Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di SORL1 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

SorLA Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus SORL1 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione SORL1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di SorLA. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus SORL1 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da SorLA nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via SorLA nelle cellule tumorali con espressione di SORL1 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.