SNAP 25 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-401138-ACT

O SNAP25 humano codifica a proteína 25 associada a sinaptossomos, um t-SNARE central que se monta com sintaxina e VAMP/sinaptobrevina para promover o ancoramento de vesículas sinápticas e a fusão de membranas desencadeada por Ca²⁺. A atividade do SNAP25 é essencial para a exocitose regulada, modulando a probabilidade de liberação de neurotransmissores, a plasticidade de curto prazo e a reciclagem de vesículas presinápticas na via de tráfego vesicular mediada por SNARE. Ao acoplar a fusão vesicular à sinalização de cálcio e à organização do citoesqueleto presináptico, o SNAP25 influencia a excitabilidade de redes neuronais e a maturação de circuitos. Alterações na expressão ou na função de SNAP25 têm sido associadas, em estudos genéticos e funcionais, a fenótipos do neurodesenvolvimento e neuropsiquiátricos, o que o torna um alvo útil para investigar mecanismos de disfunção sináptica.

SNAP 25 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de SNAP25 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

SNAP 25 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus SNAP25 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição SNAP25, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de SNAP 25. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus SNAP25 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de SNAP 25 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via SNAP 25 em células tumorais com expressão de SNAP25 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.