SmcX Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-405760-ACT

O KDM5C humano codifica o regulador de cromatina SmcX, uma desmetilase de histonas contendo o domínio Jumonji C (JmjC) que remove preferencialmente a metilação de H3K4 para moldar programas transcricionais. Ao modular estados de cromatina em promotores e enhancers, a SmcX influencia a expressão gênica dependente da RNA polimerase II, a diferenciação neuronal e o controle transcricional ligado ao ciclo celular. A atividade do KDM5C interage com vias epigenéticas que coordenam a acessibilidade da cromatina, respostas a danos no DNA e a regulação gênica específica de linhagem. A desregulação ou mutação de KDM5C tem sido associada a fenótipos do neurodesenvolvimento e a alterações da homeostase transcricional, motivando estudos mecanísticos da biologia de doenças impulsionada pela cromatina.

SmcX O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de KDM5C sem alterar a sequência de ADN subjacente.

SmcX O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus KDM5C em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição KDM5C, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de SmcX. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus KDM5C nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de SmcX no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via SmcX em células tumorais com expressão de KDM5C silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.