SMC6 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-402805-ACT

SMC6は、SMC5/6複合体の中核サブユニットをコードしており、この複合体はATP依存性の染色体維持機構として、DNA複製および修復の過程でゲノム安定性を保護します。SMC6は、複製ストレスの解消、DNA二本鎖切断の修復、相同組換えの制御を支え、染色体分配やテロメア維持にも寄与します。これらの機能を通じてSMC6はDNA損傷応答やチェックポイント連動プロセスに関与し、染色体異常の蓄積を抑制します。SMC5/6複合体活性の制御異常は、がん生物学に関連するゲノム不安定性の表現型や、遺伝性の染色体切断・複製ストレス症候群と関連づけられています。

SMC6 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性SMC6の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

SMC6 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における SMC6 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はSMC6転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性SMC6の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のSMC6遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるSMC6依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびSMC6発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるSMC6経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。