Plasmide Double Nickase (h) Smad7: sc-400251-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) Smad7 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide Smad7 Double Nickase (h) et le plasmide Smad7 Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant SMAD7. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: Smad7 Antibody (B-8): sc-365846
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) Smad7 | sc-400251-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) Smad7 | sc-400251-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
SMAD7 code Smad7, un SMAD inhibiteur qui assure un contrôle par rétroaction négative des voies de signalisation TGF-β et BMP en interférant avec la phosphorylation, médiée par les récepteurs, des SMAD régulés par le récepteur, et en favorisant le renouvellement des récepteurs. En modulant la transcription dépendante des SMAD, Smad7 influence la transition épithélio-mésenchymateuse, le remodelage de la matrice extracellulaire, la signalisation immunitaire et inflammatoire, ainsi que la régulation du cycle cellulaire. Une activité dysrégulée de SMAD7 a été associée à des réponses fibreuses altérées et à des phénotypes inflammatoires, ainsi qu’à des rôles dépendants du contexte dans la progression tumorale via ses effets sur la sortie de la voie TGF-β. En tant que point de contrôle de la voie, SMAD7 est fréquemment étudié afin de décortiquer l’amplitude et la cinétique du signal dans les réseaux canoniques TGF-β/SMAD et leurs interactions avec les voies MAPK et NF-κB.
Smad7 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus SMAD7 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de SMAD7. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de SMAD7. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de SMAD7.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.