Plásmido Doble Nickase (m) Smad3: sc-421526-NIC

Smad3 de ratón codifica un factor de transcripción R-SMAD que transmite señales de los receptores de TGF-β/Activina desde el citoplasma hasta el núcleo para regular programas génicos que controlan la proliferación, la diferenciación, la producción de matriz extracelular y la modulación inmunitaria. Tras la fosforilación mediada por el receptor, SMAD3 forma complejos con SMAD4 y coopera con cofactores específicos de linaje para moldear la accesibilidad de la cromatina y los resultados transcripcionales. La señalización de SMAD3 se entrecruza con las vías MAPK, PI3K–AKT y NF-κB, contribuyendo a un diálogo cruzado dependiente del contexto entre respuestas inflamatorias y fibróticas. La actividad desregulada de SMAD3 está implicada en la remodelación tisular patológica y la fibrosis, la alteración de la homeostasis inmunitaria y la señalización del microambiente tumoral, lo que la convierte en un nodo clave para estudios mecanísticos de la biología impulsada por TGF-β.

Smad3 El plásmido de doble nicasa (m) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus Smad3 en líneas celulares mouse. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de Smad3. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de Smad3. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con Smad3 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.